Vitamin B1 im Vollblut und Vitamin B6 im Vollblut/Plasma - HPLC

Bestell-Nr.: 52052, für 100 Tests
Parameter:
Vitamin B1 (TPP, Thiaminpyrophosphat), Vitamin B6 (PLP, Pyridoxal-5’-phosphat)

Spezifischer interner Standard für jeden Parameter
Keine Nachsäulen-Derivatisierung
Eine Probenvorbereitung und ein Lauf für beide Parameter

Vitamin B1 (TPP, Thiaminpyrophosphat)

Vitamin B6 (PLP, Pyridoxal-5’-phosphat)

Klinische Relevanz

Vitamin B1 (Thiamin) spielt eine wichtige Rolle bei der Energiegewinnung aus Kohlenhydraten und Fetten. Die aktive Form ist das Thiaminpyrophosphat (TPP), ein Coenzym für einige enzymatische Reaktionen des Kohlenhydratstoffwechsels sowie für die Pyruvat-Decarboxylase. TPP ist außerdem beim oxidativen Glucoseabbau maßgeblich beteiligt. Die Bestimmung der Konzentration von TPP ist aussagekräftiger als Messungen des Gesamtthiamins, da so ausschließlich die physiologisch wirksame Form berücksichtigt wird.

Vitamin B6 umfasst Pyridoxin, Pyridoxamin und Pyridoxal sowie deren Phosphatderivate. Es wird über die Nahrung aufgenommen und über mehrere enzymatische Umwandlungen in die aktive Form Pyridoxal-5‘-Phosphat (PLP) überführt. PLP ist an nahezu hundert enzymatischen Reaktionen beteiligt, unter anderem als Cofaktor beim Aminosäurestoffwechsel sowie bei der Bildung des roten Blutfarbstoffs und von Neurotransmittern im Gehirn.

 

Produktvorteile

  • Spezifischer interner Standard für jeden Parameter
  • Keine Nachsäulen-Derivatisierung
  • Eine Probenvorbereitung und ein Lauf für beide Parameter

 

Dieser Chromsystems-Kit ermöglicht die kombinierte Bestimmung von Vitamin B1 im Vollblut und Vitamin B6 im Vollblut oder Plasma. Die Probenvorbereitung kann aus unterschiedlichen Matrices erfolgen, so dass in einem Durchlauf sowohl Vollblut- als auch Plasmaproben gemessen werden können. Die Derivatisierung der Vitaminmoleküle geschieht bereits bei der Vorbereitung der Probe, so dass die verbreitete Nachsäulen-Derivatisierung hier überflüssig ist. Die Trennung erfolgt mit einem binären Gradienten. Der interne Standard für jeden der beiden Parameter sowie spezielle Qualitätskontrollen gewährleisten eine präzise und sichere Quantifizierung.

Diese Methode ist auch mit einer vereinfachten Probenvorbereitung in Pre-Mixed Tubes erhältlich.

Für Laboratorien mit höherem Probendurchsatz gibt es auch eine Methode mittels UHPLC sowie automatisierte Probenvorbereitung für HPLC- und UHPLC-Methoden.

Weitere Informationen
Anzahl der Bestimmungen 100
Bestimmungsgrenzen

TPP 2,0 μg/l (Vollblut)
PLP 4,5 μg/l (Vollblut), 0,5 μg/l (Plasma)

Linearität

PLP 500 μg/l
TPP 750 μg/l

Wiederfindungsrate ≤ 102 %
Intraassay

VK ≤ 2,3 %

Interassay

VK ≤ 5,2 %

Analysendauer 7 bis 9 min
Probenvorbereitung
  • 200 μl Vollblut bzw. Plasma mit 100 μl Internal Standard und 300 μl Precipitation Reagent in einem bernsteinfarbenen Reaktionsgefäß zusammengeben (Lichtschutz).
  • 30 s mischen (Vortex)
  • 5 min bei 14000 x g zentrifugieren.
  • In einem neuen lichtgeschützten Reaktionsgefäß 250 μl Neutralisation Reagent und 100 μl Derivatisation Mix vorlegen. 250 μl des Überstandes zugeben.
  • 25 min bei 60°C inkubieren (Wasserbad).
  • Probe 10 min bei +2 bis +8°C abkühlen und anschließend 2 min bei 14000 x g zentrifugieren.
  • Überstand in lichtgeschütztes Autosamplergefäß überführen, 25–50 μl in das HPLCSystem injizieren.
Probenstabilität Die vorbereiteten Proben sind bei Raumtemperatur einen Tag, bei +2 bis +8 °C 7 Tage haltbar. Bei längerer Lagerung (max. 2 Wochen) die Proben unter -18 °C aufbewahren.
Probenmaterial Vollblut/Plasma
Präanalytik Die Patientenproben sind lichtgeschützt in einem geschlossenen Gefäß bei +2 bis +8 °C eine Woche haltbar. Für eine längere Lagerung (bis zu 2 Wochen) die Proben unter -18 °C aufbewahren.
Injektionsvolumen 25–50 μl
Flussrate 1.5–2.3 ml/min
Säulentemperatur Raumtemperatur (~25°C)
Messwellenlänge

Start mit EX 320 nm, EM 415 nm,

nach ca. 3,8 min auf EX 367 nm, EM 435 nm umschalten

Gradient binär
Hinweis Bitte beachten Sie, dass die frei zugänglichen Informationen dieser Website, insbesondere auch der Probenvorbereitung, nicht zur Verwendung der Produkte ausreichen. Bitte lesen Sie dazu die Anweisungen und Warnhinweise auf Produkten und/oder in der Arbeitsvorschrift.
Method of Analysis HPLC
Parameter Vitamin B1 (TPP, Thiaminpyrophosphat), Vitamin B6 (PLP, Pyridoxal-5’-phosphat)
Zusätzliche Informationen Es eignet sich jedes gängige HPLC-System mit binärer Pumpe und programmierbarem Fluoreszenz-Detektor.
  1. 52001 HPLC mobile phase A vitamin B1 vitamin B6 whole blood plasma
    Mobile Phase A
    Bestell-Nr.: 52001

    Vitamin B1 im Vollblut und Vitamin B6 im Vollblut/Plasma - HPLC

    Details
  2. 52022 HPLC mobile phase B vitamin B1 vitamin B6 whole blood plasma
    Mobile Phase B
    Bestell-Nr.: 52022

    Vitamin B1 im Vollblut und Vitamin B6 im Vollblut/Plasma - HPLC

    Details
  3. 52003 HPLC whole blood calibration standard vitamin B1 vitamin B6
    Vitamins B1/B6 Whole Blood Calibration Standard
    Bestell-Nr.: 52003
    Vitamin B1 im Vollblut und Vitamin B6 im Vollblut/Plasma - HPLC/UHPLC
    Details
  4. 52044 HPLC internal standard vitamin B1 vitamin B6 whole blood plasma
    Internal Standard
    Bestell-Nr.: 52044
    Vitamin B1 im Vollblut und Vitamin B6 im Vollblut/Plasma - HPLC/UHPLC
    Details
  5. 52005 HPLC precipitation reagent vitamin B1 vitamin B6 whole blood plasma
    Precipitation Reagent
    Bestell-Nr.: 52005

    Vitamin B1 im Vollblut und Vitamin B6 im Vollblut/Plasma - HPLC/UHPLC

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  6. 52006 HPLC neutralisation reagent vitamin B1 vitamin B6 whole blood plasma
    Neutralisation Reagent
    Bestell-Nr.: 52006

    Vitamin B1 im Vollblut und Vitamin B6 im Vollblut/Plasma - HPLC

    Details
  7. 52007 HPLC derivatisation reagent 1 vitamin B1 whole blood vitamin B6 whole blood plasma
    Derivatisation Reagent 1 (lyoph.)
    Bestell-Nr.: 52007
    Vitamin B1 im Vollblut und Vitamin B6 im Vollblut/Plasma - HPLC/UHPLC
    Details
  8. 52008 HPLC derivatisation reagent 2 vitamin B1 whole blood vitamin B6 whole blood plasma
    Derivatisation Reagent 2
    Bestell-Nr.: 52008

    Vitamin B1 im Vollblut und Vitamin B6 im Vollblut/Plasma - HPLC/UHPLC

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  9. Reaktionsgefäße
    Reaktionsgefäße
    Bestell-Nr.: 33005
    Bernsteinfarben für Lichtschutz
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  1. 36005 HPLC plasma calibration standard vitamin B6
    Vitamin B6 Plasma Calibration Standard
    Bestell-Nr.: 36005

    Vitamin B6 im Serum/Plasma - HPLC/UHPLC

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  2. 52003 HPLC whole blood calibration standard vitamin B1 vitamin B6
    Vitamins B1/B6 Whole Blood Calibration Standard
    Bestell-Nr.: 52003
    Vitamin B1 im Vollblut und Vitamin B6 im Vollblut/Plasma - HPLC/UHPLC
    Details
  1. 0164 0165 0167 HPLC vitamin B1 vitamin B6 whole blood controls
    Vitamins B1/B6 Whole Blood Controls
    Bestell-Nr.: 0164/0165/0167
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  2. 0031 0038 0039 HPLC vitamin B6 plasma controls
    Vitamin B6 Plasma Controls
    Bestell-Nr.: 0031/0038/0039
    Details
  1. PEEK-encased Vorfilterblättchen, 2 µm
    Details
  2. PEEK-Vorfiltergehäuse
    PEEK-Vorfiltergehäuse
    Bestell-Nr.: 15010
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  3. 52100 HPLC column vitamin B1 vitamin B6 whole blood plasma
    HPLC-Säule
    Bestell-Nr.: 52100

    Vitamin B1 im Vollblut und Vitamin B6 im Vollblut/Plasma - HPLC

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  4. Halter für Vorsäulenkartuschen 4/10
    Details
  5. Vorsäulenkartusche 4/10
    Vorsäulenkartusche 4/10
    Bestell-Nr.: 18052
    Vitamine B1 und B6 - HPLC/UHPLC
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