Glutathion im Vollblut - HPLC

Bestell-Nr.: 66000, für 100 Tests
Parameter:
Freies Glutathion (GSH), Glutathionedisulfid (GSSG)

Reduzierte und oxidierte Form werden erfasst
Nur 10 µl Probenvolumen
Hohe Zuverlässigkeit durch Verwendung eines internen Standards

Freies Glutathion (GSH)

Glutathionedisulfid (GSSG)

Klinische Relevanz

Glutathion ist ein Tripeptid, das in fast allen Zellen in hohen Konzentrationen vorkommt und zu den wichtigsten antioxidativ wirkenden Substanzen im Körper gehört. Es liegt in einer reduzierten (GSH) und einer oxidierten Form (GSSG) vor, dessen Mengenverhältnis den Redoxstatus der Zelle charakterisiert. Glutathion ist unter anderem in den Erythrocyten von besonderer Bedeutung. Hier ist es an der Reduktion von Methämoglobin zu Hämoglobin beteiligt, welches wieder Sauerstoff binden kann. Des Weiteren ist Glutathion in den Körperzellen für viele reduzierende Reaktionen erforderlich und reguliert damit die Konzentration von freien Radikalen. In der Leber bildet Glutathion Konjugate zur Ausscheidung von toxischen Fremdstoffen. Dort inaktiviert es auch bei der Verstoffwechselung von bestimmten Medikamenten reaktive Zwischenprodukte. So kann eine erhöhte GSSG-Konzentration ein Hinweis auf Lebernekrose oder -dystrophie sein.

 

Produktvorteile

  • Reduzierte und oxidierte Form werden erfasst
  • Schon 10 µl Probenvolumen ist ausreichend
  • Hohe Zuverlässigkeit durch Verwendung eines internen Standards

 

Mit diesem Kit kann sowohl GSH als auch GSSG aus nur 10 µl Vollblut zuverlässig quantifiziert werden. Die Probenvorbereitung basiert auf einer Proteinfällung und Derivatisierung für die nachfolgende HPLC-Bestimmung mit Fluoreszenzdetektion. Nach der Fällung wird der Probenansatz geteilt und ein Aliquot zur Messung des reduzierten Glutathions unmittelbar derivatisiert. Das zweite Aliquot wird zunächst einem Reduktionsschritt unterworfen und hieraus die Summe von reduziertem und oxidiertem Glutathion bestimmt. Durch die Verwendung eines optimierten internen Standards werden analytische Schwankungen minimiert, die das GSSG/GSH-Verhältnis verfälschen könnten.

Weitere Informationen
Analysenmethode HPLC
Anzahl der Bestimmungen 100
Bestimmungsgrenzen 5 µmol/l
Linearität bis 15000 µmol/l
Wiederfindungsrate 99 %
Intraassay

VK ≤ 4,6 %

Interassay VK ≤ 4 %
Analysendauer 5 min
Probenmaterial Vollblut
Präanalytik Genaue Informationen zur Gewinnung und Haltbarkeit von Patientenproben entnehmen Sie bitte der speziellen Literatur.
Probenvorbereitung

1) Vorbereitung der Vollblutproben:

  • In lichtgeschütztem Reaktionsgefäß 150 μl Internal Standard vorlegen.
  • 10 μl Vollblut zugeben und durch Nachspülen der Pipettenspitze mischen
  • 2 s vortexen.
  • 400 μl Precipitation Reagent zugeben, mindestens 30 s mischen (Vortex).
  • 7 min bei 9000 x g zentrifugieren.

2) Bestimmung des freien Glutathions:

  • 50 μl des Überstands von Schritt 1) in ein frisches, lichtgeschütztes Reaktionsgefäß überführen.
  • 100 μl Derivatisierungs-Mix zugeben und gut mischen.
  • 10 min bei +50 bis +55 °C im Wasserbad inkubieren, danach sofort abkühlen.
  • 20 μl in das HPLC-System injizieren.

3) Bestimmung der Summe von oxidiertem und freiem Glutathion:

  • 50 μl des Überstands von Schritt 1) in ein frisches, bernsteinfarbenes Reaktionsgefäß überführen.
  • 10 μl Reduktions-Mix zugeben und 2 s mischen (Vortex).
  • 5 min bei Raumtemperatur inkubieren.
  • 100 μl Derivatisierungs-Mix zugeben und gut mischen.
  • 10 min bei +50 bis +55 °C im Wasserbad inkubieren. danach sofort abkühlen.
  • 20 μl in das HPLC-System injizieren.
Probenstabilität Die vorbereiteten Proben sind bei Raumtemperatur 2 Tage und bei +2 bis +8 °C 5 Tage haltbar. Der nicht derivatisierte Überstand ist bei +2 bis +8 °C bis zu 3 Tage haltbar.
Injektionsvolumen 20 µl
Flussrate 1,3 ml/min
Säulentemperatur Raumtemperatur (~ 25 °C)
Messwellenlänge EX 385 nm, EM 515 nm
Gradient Isokratisch
Zusätzliche Informationen Es eignet sich jedes gängige isokratische HPLC-System mit Fluoreszenz-Detektor.

Hinweis Bitte beachten Sie, dass die frei zugänglichen Informationen dieser Website, insbesondere auch der Probenvorbereitung, nicht zur Verwendung der Produkte ausreichen. Bitte lesen Sie dazu die Anweisungen und Warnhinweise auf Produkten und/oder in der Arbeitsvorschrift.
Parameter Freies Glutathion (GSH), Glutathionedisulfid (GSSG)
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