Crosslinks im Urin - HPLC

Bestell-Nr.: 48000, für 100 Tests
Parameter:
Deoxypyridinolin (DPD), Pyridinolin (PYD)

Interner Standard, hydrolysestabil
Einfache Probenvorbereitung
Exakte Kalibrierung

Deoxypyridinolin (DPD)

Pyridinolin (PYD)

Klinische Relevanz

Pyridinolin (PYD) und Desoxypyridinolin (DPD) entstehen zur strukturellen Stabilisierung als Quervernetzungen („Crosslinks“) bei der Bildung von Kollagenfibrillen. Bei einem pathologischen Knochenabbau erhöhen sich die Konzentrationen von PYD und DPD im Urin, beispielsweise bei der Osteoporose oder bei diversen Knochentumoren. Daher sind PYD und DPD direkte Marker zur Diagnose von postmenopausaler Osteoporose sowie zur Therapiekontrolle nach Medikamenteneinnahme. Bei erfolgreicher Therapie kann bereits innerhalb von wenigen Monaten ein deutlicher Abfall der Crosslinks im Urin festgestellt werden. Weiterhin werden Crosslink-Konzentrationen im Urin auch bei Patienten mit einem Frakturrisiko überprüft, um bei erhöhten Werten bereits im Vorfeld geeignete Maßnahmen zu ergreifen.

 

Produktvorteile

  • Hydrolysestabiler interner Standard
  • Einfache Probenvorbereitung
  • Präzise und zuverlässige Kalibrierung

 

Dieser Kit erlaubt die gleichzeitige Bestimmung von Pyridinolin (PYD) und Desoxypyridinolin (DPD) im Urin mit einfachen isokratischen HPLC-Systemen. Die chromatographische Trennung erfolgt an einer RP-Säule mit nachfolgender Fluoreszenz-Detektion. Durch Verwendung eines hydrolysestabilen internen Standards können Präzision und Zuverlässigkeit der Bestimmung maximiert werden. Mittels Festphasenextraktion werden störende Fluorophore entfernt und anschließend PYD, DPD und interner Standard in einem Lauf eluiert.

Weitere Informationen
Anzahl der Bestimmungen 100
Bestimmungsgrenzen

Pyridinolin: 15 pmol/ml
Deoxypyridinolin: 15 pmol/ml

Linearität

Pyridinolin: bis zu 3200 pmol/ml
Deoxypyridinolin: bis zu 1200 pmol/ml

Wiederfindungsrate Pyridinolin: 95,5 % (VK: 1,4 %); Deoxypyridinolin: 93,6 % (VK: 2,0 %)
Intraassay

Pyridinolin: VK = 3,8 %
Deoxypyridinolin: VK = 5,9 %

Interassay

Pyridinolin: VK = 5,1 %
Deoxypyridinolin: VK = 8,9 %

Analysendauer < 15 Minuten
Probenvorbereitung
  • 250 µl Urin, 50 µl Internal Standard und 250 µl konz. HCl zusammengeben und bei 100°C ca. 12-16 Stunden (über Nacht) hydrolysieren.

  • Je 2,5 ml Extraction Buffer zugeben, mischen.

  • Die SPE-Säulchen mit 2,0 ml Wash Buffer konditionieren.

  • Das gesamte Probenvolumen auf diese Säulchen geben und mit ca. 170 x g vollständig durchzentrifugieren. Den Durchlauf verwerfen.

  • Auf jede Säule 2,5 ml Wash Buffer geben, bei ca. 700 x g durchzentrifugieren. Durchlauf verwerfen. Diesen Schritt zweimal wiederholen.

  • Auffangröhrchen wechseln

  • Anschließend 1,0 ml Elution Buffer auf jede Säule geben und bei ca. 700 x g vollständig durchzentrifugieren. Das Eluat gründlich mischen.

  • 50 µl des Eluates injizieren.

Probenstabilität Die vorbereiteten Proben/Eluate sind bei Raumtemperatur 2 Tage und bei +2 bis +8 °C ca. 4 Tage stabil.
Probenmaterial Spontan- oder Sammelurin
Präanalytik

Die Patientenproben können bei Raumtemperatur versendet werden. Ihre Haltbarkeit beträgt bei +4 °C 7 Tage. Für eine längere Lagerung die Proben unter -18 °C aufbewahren. Lichtschutz beachten.

Injektionsvolumen 50 µl
Flussrate 1,2 ml/min
Säulentemperatur Raumtemperatur (~ 25 °C)
Messwellenlänge EX 290 nm
EM 395 nm
Gradient isokratisch
Hinweis Die hier aufgeführten Produktinformationen sind beispielhaft. Bitte beachten Sie die Angaben in Arbeitsvorschrift und Beipackzetteln.
Method of Analysis HPLC
Parameter Deoxypyridinolin (DPD), Pyridinolin (PYD)
Zusätzliche Informationen Es ist jedes gängige isokratische HPLC-System mit Fluoreszenz-Detektor geeignet.

  1. 48001 HPLC mobile phase crosslinks urine
    Mobile Phase
    Bestell-Nr.: 48001
    Crosslinks im Urin - HPLC
    Details
  2. 48001 HPLC mobile phase crosslinks urine
    Mobile Phase, 10 x 1000ml
    Bestell-Nr.: 48002
    Crosslinks im Urin - HPLC
    Details
  3. 48003 HPLC crosslinks urine calibration standard
    Crosslinks Urine Calibration Standard
    Bestell-Nr.: 48003
    Crosslinks im Urin - HPLC
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  4. 48004 HPLC internal standard crosslinks urine
    Internal Standard
    Bestell-Nr.: 48004
    Crosslinks im Urin - HPLC
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  5. 48005 HPLC extraction buffer crosslinks urine
    Extraction Buffer
    Bestell-Nr.: 48005
    Crosslinks im Urin - HPLC
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  6. 48006 HPLC wash buffer crosslinks urine
    Wash Buffer
    Bestell-Nr.: 48006
    Crosslinks im Urin - HPLC
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    Elution Buffer
    Bestell-Nr.: 48007
    Crosslinks im Urin - HPLC
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    Bestell-Nr.: 48008
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    Crosslinks Urine Controls
    Bestell-Nr.: 0045/0046/0047
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    PEEK-Vorfiltergehäuse
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    HPLC-Säule Crosslinks im Urin
    Bestell-Nr.: 48100
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    Test-Mix
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    Vorsäulenkartusche 4/10
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    Hydrolysegläser
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    Schraubverschlüsse
    Bestell-Nr.: 48011
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